RIPA裂解缓冲液
K1006-120ml
描述：RIPA 裂解缓冲液，提供完整的细胞蛋白制备方案。
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典和最常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA Buffer制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作，适用于大部分抗原表位的检测，特别适用于免疫共沉淀检测蛋白质-蛋白质之间的相互作用。我们提供的RIPA Buffer的成分为：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS，适于western blot和绝大多数蛋白-蛋白相互作用的免疫共沉淀。
组成： 100 ml RIPA Buffer：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.
储存：4 oC。
制备细胞裂解产物
1. 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；
2. 每50～100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250~500 ml）,冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
3. 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；
4. 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。
制备组织裂解产物
1. 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；
2. 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液；
3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
4. 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
5. 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
6. 20％的甘油保存于 -70 oC 或-20 oC。
注意：
1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；
3. 在该RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂。
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