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生化测定试剂盒


H1005 | 组织冰冻切片包埋剂(TissueCT-FreezeMedium)

组织冰冻切片包埋剂(TissueCT-FreezeMedium)  

H1005-100ML   

 

描述:冷室、组织块、包埋剂、切片刀之间的温度平衡于优化的切片温度(optimum cutting temperature, OCT)附近,是获得高质量冰冻切片的保证。不同的组织因构成和脂质各异而具有不同的OCT温度。冰冻组织在接触刀刃的瞬间,局部温度短暂升高shatter发生局部融化;随后切开的组织薄片暴露于冷室被再次骤冷冰冻。这种融化-冰冻温度变化是切片皱褶或断裂的内在原因,在此基础上切片的软硬度和厚薄度进一步影响皱褶产生(1)。在切片过程中,冰冻包埋剂也须历经与组织类似的温度变化,这就要求包埋剂必须具有与组织块相近的冰冻速度和软硬韧度。

Tissue OCT-Freeze Medium是由高分子聚合物组成的无色透明粘稠液体,骤冷时固化,其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近,因而能保证优化的OCT温度,并具有支持填充、减少皱褶和断裂等作用。可任意添加于切片机的样品架以支持和固定样品。与广为使用的Tissue-Tek OCT Compound包埋剂相比,普利莱的包埋剂的突出优点支持超薄和超厚(2~100 µm)冰冻切片并减少皱褶和断裂。不影响后续免疫组化、原位杂交、病理染色操作,并可经由水或PBS冲洗完全去除,是理想的组织冰冻包埋剂。

组成:120 ml4ºC 1年。可常温放置。常温和4ºC为无色透明粘稠液体,温度降低时逐渐变粘稠并固化。

适用:组织和培养细胞的冰冻包埋固定。用于临床快速病理染色诊断、免疫组化、原位杂交。

使用前标本准备

冰冻切片标本可采用 (1) 新鲜组织,特点是快,但未用完的包埋组织块不能保存;(2) 经典使用10%甲醛或4%多聚甲醛室温2~10分钟固定过的组织,优点是既不影响后续步骤,包埋组织块一又可长期冰冻保存,随时再用,缺点是步骤稍繁。(3) 培养细胞,800g离心10分钟收集培养细胞,用吸头或针头拨出细胞沉淀块,放入OCT包埋剂内。

避免采用降低组织冰点的甲醇乙醇固定。本产品说明书不提供关于组织取材、渗透、固定、冰冻切片等技术信息。用户应阅读冰冻切片机操作手册,参考各种常规技术方法。

使用方法

1. OCT包埋:用水或PBS冲洗固定的组织块,滤纸吸去液体。盛标本的包埋模子内挤出适量的包埋剂,放入组织和细胞沉淀块,加包埋剂完全埋没组织块。可用2铝箔纸折叠成简易的模子。如有气泡可用针头或吸头吸出。

2. 冰冻:将盛有组织细胞和包埋剂的模子,正置于切片机冷室内冰冻10分钟。包埋剂呈乳白色固体。包埋剂和组织冷冻时体积略有膨胀,因此模子应正置,由底部向顶部进行冰冻。也可将OCT包埋的组织置于干冰或液氮,或放入-40~70 ºC冰箱冰冻固化保存,用前取出置于切片机冷室内平衡温度(否则损坏刀)

3. 切片:可在切片机的组织卡盘(chuck)上加少许包埋剂并在其固化前嵌入组织块,然后再于组织周围加入少许包埋剂稳定之。常规切片。厚度范围2~100 µm

4. 收片后用适量水或PBS冲洗切片2−3分钟3次,洗除包埋剂。常规组化染色、病理染色、原位杂交。未用完的组织块可冷冻储存。

表一:新鲜组织的冰冻切片OCT温度。固定过的组织的OCT温度升高相应5~10°C

组织

°C

组织

°C

组织

°C

子宫刮出物

-7

−15

子宫颈

−20

−10

−16

卵巢

−20

−10

肌肉

−16

前列腺

−20

−10

结蹄组织

−16

消化道

−20

睾丸

−10

皮肤

−16

骨髓

−20

甲状腺

−10

−18

连脂肪皮肤

−25

−13

胰腺

−20

乳腺

−30

淋巴结

−15

子宫

−20

网膜脂肪

−35

通常折中采用−20°C。肝脑脾等组织的OCT切片温度应在10 ºC,否则易碎。脂肪或含脂肪多的组织的OCT切片温度更低,否则易皱褶

表二 常见问题

易碎

冷冻过快,或标本太大

组织、包埋块从支架脱落

包埋剂不足,组织在包埋剂中的位置过偏

组织向前推进但不能顺利切片

刀和组织未固定紧,刀的角度不合适,组织未完全冷冻

切片卷曲

Anti-roll plate不干净,切片太薄,刀钝

切片撕裂

组织过分冷冻,刀口受损、不洁

切片融化

冷室和刀的温度不正确

刀上有雾

切片机开盖时间过长

切片粘在 anti-roll plate

温度不正确,anti-roll plate不洁

切片歪向一侧

刀口钝、受损,anti-roll plate受损

切片从玻片脱落

没用玻片粘附剂,切的是固定组织、脂肪含量高的标本,操作粗糙

切片水平裂痕

切片时标本太冷